¿Cómo se prueba la endotoxina?

2019-11-02

Ensayo de lisado de amebocitos liofilizados (El ensayo LAL) es la prueba más comúnmente usada para la endotoxina. El lisado de amebocitos de Limulus (LAL), es decir, el lisado de amebocitos de taquizo (TAL), es un tipo de producto liofilizado que contiene principalmente los amebocitos extraídos de la sangre azul del cangrejo herradura.

La LAL reacciona con las endotoxinas, que son pequeñas moléculas de lipopolisacáridos hidrófobos (LPS, por sus siglas en inglés) de origen bacteriano que se ubican en la membrana celular externa de las bacterias gramnegativas, para formar un coágulo de gel que se puede cuantificar. La endotoxina se mide en unidades de endotoxina por mililitro (EU / mL).

La técnica turbidimétrica y la técnica cromogénica también se emplean para detectar endotoxinas.

El principio de reacción de la técnica cromogénica es que: el lisado de amebocitos contiene una cascada de enzimas serina proteasas (proenzimas) que pueden ser activadas por endotoxinas bacterianas. Las endotoxinas activan las proenzimas para producir enzimas activadas (denominadas coagulasa), esta última cataliza la división del sustrato incoloro, liberando un producto de color amarillo pNA. El pNA liberado puede medirse fotométricamente a 405 nm. Y la absorbancia se correlaciona positivamente con la concentración de endotoxinas, entonces la concentración de endotoxinas podría cuantificarse en consecuencia.

Y el principio de reacción de la técnica turbidimétrica es similar al de la técnica cromogénica.


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